1、將預(yù)先連接在固相載體上的活性基團(tuán)被保護(hù)的核苷酸與三氯乙酸反應(yīng)，脫去其5羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT，獲得游離的5羥基。

2、合成DNA的原料，亞磷酰胺保護(hù)核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3端被活化，5羥基仍然被DMT保護(hù)，與溶液中游離的5羥基發(fā)生縮合反應(yīng)。

3、帶帽反應(yīng)，縮合反應(yīng)中可能有極少數(shù)5羥基沒(méi)有參加反應(yīng)，用乙酸酐和甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng)，這種短片段可以在后續(xù)環(huán)節(jié)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要來(lái)選擇純化方式分離掉。

4、在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。這樣即可合成引物。